软海绵酸相关应用说明大田软海绵酸液相色谱串联质谱检测方法的研究目的：利用高效液相色谱-串联质谱法建立海产品中大田软海绵酸(Okadaic acid, OA)的检测方法。方法：贝样品提取液经AccuBond(上标 Ⅱ) SPE silica固相萃取小柱预分离和富集，用三级四极杆串联质谱(MS/MS)作为HPLC的检测器，使用正离子电喷雾(ESI)电离方式，多反应监测(MRM)扫描模式，选择母→子离子对m/z 827→m/z 723，m/z827→m/z809作为定量检测的离子对，HPLC的流动相为乙腈：1%甲酸－水（体积比70:30），色谱柱为Agilent Extend-C18(2.1×150mm，Φ5.0μm)，对OA标准品及加标样品和实际样品进行HPLC-MS/MS检测。结果：方法线性回归方程为Y=193.07X-780.6(Q1/Q3：m/z827.4→723.5); Y=83.021X-335.6(Q1/Q3：m/z827.4→509.5)，相关系数r^2均为0.9991；线性范围为10~800μg/L。样品平均回收率为83.99%，平均RSD为4.34%。结论：建立的HPLC-MS/MS方法灵敏、快速、准确，可用于海产品中贝类样品OA限量标准检测。大田软海绵酸对FL细胞DNA的损伤及凋亡相关蛋白表达的影响本文旨在探讨大田软海绵酸对人羊膜细胞DNA的损伤及凋亡相关蛋白表达的影响。实验用0、20、40、60、80、100nmol/L OA诱导FL细胞4h后，检测DNA损伤程度的彗星实验表明，OA对FL细胞DNA的损伤随染毒浓度的升高而增加。蛋白免疫印迹法显示凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和p53的表达与染毒浓度呈负相关；用100nmol/L OA分别诱导2h、4h、8h后发现，三种蛋白的表达与染毒时间也呈负相关。由此可知在OA诱导的FL细胞凋亡中，损伤DNA，降低Bcl-2蛋白的表达可能参与了凋亡的部分作用，而Bax和p53蛋白则可能与OA诱导的细胞增殖有关。抗大田软海绵酸单克隆抗体的制备、纯化及其特性用大田软海绵酸与人IgG的偶联物OA-IgG作为免疫原，免疫BALB/c小鼠，通过常规细胞融合技术将免疫脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞系SP2/0融合，用间接竞争ELISA方法对融合细胞所分泌抗体的特异性进行筛选。经过3次克隆，获得1株可稳定分泌抗OA的杂交瘤细胞株3C5，其染色体数为50±2，所分泌杭体属IgG1亚类，相对分子质量是159390，抗体亲和常数为9.8×10^8L/mol，滴度达2.56×l0^6。大田软海绵酸诱导细胞凋亡的机制大田软海绵酸是一种公认的促癌剂，也是腹泻性贝类毒素的主要成分之一，主要由共生于大田软海绵和隐瓜海绵中的利马原甲藻所产生，它在细胞的生长、分化，代谢和死亡中都起着重要的调节作用：现在它已作为一种非常有效的生物工具药被广泛用于基础生命科学的研究，其中有关它对不同细胞株的复杂凋亡诱导机制更是得到了普遍的关注和重视。本文主要概述Fas-FasL，Caspase，Bcl-2和p53等在大田软海绵酸(okadaic acid, OA)诱导的细胞凋亡机制中的作用。
Okadaic acid 25.micro.g
Okadaic acid 50.micro.g
Okadaic acid 100.micro.g
Okadaic acid 1 mg
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