A:打开高压输液泵,首先用甲醇冲洗(包括清洗和启动泵),在这个时间内去配制流动相,配流动相时注意有机溶剂(色谱纯)和水(二次蒸馏水)分别用油膜和水膜过滤,然后混合放在超声波清洗器中脱气15min。
清洗步骤:首先逆时针旋转排空阀180度,按清洗,5min后停止,再旋转回来。
B:停泵换上5%甲醇水溶液(常备)冲洗(包括清洗和启动泵),停泵再换上流动相冲洗(包括清洗和启动泵),流量是1ml/min即可。
注意:清洗时需要旋开排空阀,启动泵时关闭排空阀。
C:打开紫外检测器,初始化完毕后退出,进入定波长时间扫描方式在参数设置里设置检测波长退出,并点击开始(查看基线)。
D:打开在线工作站,填写实验信息后,在数据采集中查看基线,电压范围为—10——100即可,基线平稳且氘灯预热半小时后即可进样。
E:基线平稳时间内进行样品处理,样品最后要用针头式过滤器过滤(注意油膜和水膜)。
F:进样顺序:首先把进样阀旋至load位置,用平头微量进样器吸取多于20ul的样品,充分插入进样阀进样,旋进样阀至inject位置拔出进样器。
G:工作站自动采集数据完毕后停止采集,保存数据到适当位置,在方法的谱图显示中调适当的电压范围,预览打印即可。然后进另一批次的样品。
H:实验完毕后,首先把检测器退出关闭,半小时后,停泵换上5%甲醇水溶液冲洗(包括清洗和启动泵),停泵再用色谱甲醇冲洗(包括清洗和启动泵)至高压输液泵压力稳定即可停泵关闭。
I:注意 需要检测温度时需打开柱温箱设置温度。
流动相中不含缓冲盐时可以省略5%甲醇水溶液的过渡。
色谱柱长时间不用时卸下来用堵头堵住两头密封保存。
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