最近,一个新的罗氏 454测序emPCR自动化富集方案成功地在 Hamilton MICROLAB STARlet自动化移液平台上得以实现。这一实验方法利用罗氏的REM e移液系统,一次实验可以处理多达八个样本的乳液PCR产物磁珠法富集,并完成测序引物退火,直接衔接在罗氏454 GS FLX的测序实验。这一综合性的自动化系统一步完成了多个富集步骤,减少人为操作可引起的误差,使得实验结果稳定,并大大缩短实验时间。
454测序需要对制备的文库进行乳液PCR,对包含单克隆序列的测序珠进行扩增,其后需要分解改乳液体系,并对体系中的测序珠进行洗涤以及富集。在洗涤及富集过程中,需要进行反复的移液、离心、颠倒试管、磁力吸附等操作。这一自动化解决方案即替代了这一人工操作过程,只需少量的设置程序以及放置试管试剂的步骤就可以在无人情况下完成所有步骤,节省约五个小时左右的人工操作。单次自动化实验也只需3.5小时左右,相比人工实验,节省了测序实验的总时间。
一共有五种不同的自动化实验设计,配合不同的样本数量及体积。在Hamilton STARlet自动化移液台上,可以准确设定罗氏REM e系统位置,以及其配套试管架的位置,实验所需放置的试管及试剂的种类和数量也在新的实验手册中进行了详细描述。罗氏的REM e系统可以进行震荡、真空抽滤、磁珠捕获及加热等实验操作。Hamilton STARlet移液平台通过1000微升的独立移液系统移动液体。
罗氏454公司将进一步与该自动化移液平台公司合作开发配合GS Junior系统的自动化解决方案, 可在Hamilton的STAR系列及NIMBUS系列自动化移液平台上实现。小型的NIMBUS工作站与GS Junior台式测序仪结合,使得测序总量较小的客户能够获得完整而低资金投入的自动化解决方案。
此外,除了上述自动化移液平台外,罗氏的REM e系统也可以装载在其他移液平台上如Biomek及Tecan系列平台等。