Richard Mirro
New Brunswick, Enfield, CT USA
简介
Sf9昆虫细胞—杆状病毒系统被广泛用于各种重组蛋白的表达。该细胞为非贴壁依赖性细胞，适合高密度、大规模悬浮培养。利用生物反应器培养Sf9细胞可以很好的控制细胞的生长环境，大幅提高细胞的密度和蛋白的表达量。目前Sf9细胞在反应器内的悬浮培养方式主要以流加方式（Fed-batch）为主，其方法为随着细胞密度的增加和营养的消耗分次补加营养成分，但无培养液流出反应器。另外还有一种连续培养（Continuous）方式，其方法是根据连续地加入新鲜培养基，同时以相同的速度流出罐内培养液。本文主要对连续培养方式培养Sf9细胞进行介绍。
方法和设备
生物反应器：New Brunswick CelliGen 310，带旋转过滤器螺旋搅拌桨（Spin Filter Impeller） ，工作体积: 3.5 L
细胞：Sf9
培养基：Sf-900 无血清培养基，GIBCO细胞接种密度：4.0-5.0×105个/ml
灌流速度：0-0.5工作体积（根据细胞密度提高）
结果
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图1: 8日细胞密度与活细胞率示意图 |
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图2: 带旋转过滤器的搅拌桨 |
Sf9 在生物反应器内生长 8 天后达到最大密度 2.5×107个 /ml，同时活细胞率还能保持在 90% 以上（图 1）。相对于批次培养达到的最大密度6-12×106个/ml提高了2-4倍，为Sf9细胞在生物反应器内的高密度、大规模连续培养提供了基础。
讨论
带旋转过滤器螺旋搅拌桨（图 2）带有的细胞截留网（10 µm）可以将 Sf9 细胞截留在反应器内继续生长，不含细胞的上清液被灌流出反应器，同时补充新鲜培养基。这样的方式一方面提供了高密度细胞需要的营养成分；另一方面将细胞代谢产生的有害产物进行稀释，减少了对细胞的负面影响，最终实现了Sf9细胞的高密度培养。
