细胞迁移对于胚胎发育、伤口愈合、分化以及免疫应答等都是非常重要的过程。细胞迁移是血管疾病，慢性炎症疾病以及肿瘤形成等疾病的致病机理。因此，对那些具有促进（伤口愈合）或者抑制（肿瘤形成）细胞迁移作用的化合物的研究就具有非常重要的治疗意义。我们已经建立了一个使用Molecular Devices公司的SpectraMax paradigm多功能检测平台进行标准化的，自动化的高通量细胞迁移分析新方法。相对于划痕分析或者其他的2D伤口闭合实验，这个分析方法更加简单，更具可重复性。
试验描述
Oris细胞迁移试验（non-coated）（Platypus Technologies，Madison，WI）使用细胞种植抑制板（cell seeding stoppers）在每个孔的中央形成2mm直径的检测区域。人黑色素瘤细胞（50000每孔）被种植到安装有细胞种植抑制板的96微孔板。过夜培养后，细胞贴附到微孔板板底，在抑制板的作用下，形成中央2mm的细胞空白区域。移走抑制板，然后对细胞不做处理或者使用可溶性的趋化因子CXCL9以浓度依赖的方式处理，或者使用100ng/ml不同生物活性的化合物或者latrunculin（1ug）作为阴性对照进行处理。然后，黑色素瘤细胞继续培养16个小时。使用CellTracker Green（Invitrogen）对细胞染色，微孔板的底部加入Oris检测屏蔽（Detection Mask）（图1）。发生细胞迁移进入检测区域的细胞使用共聚焦显微镜（Leica TCS SP2）进行成像，数据使用SpectraMax paradigm检测平台进行定量确证（图2）。
图1：Oris细胞迁移试验原理
图2：Paradigm检测平台
图3：筛选潜在的细胞迁移刺激或者抑制因子。通过使用SpectraMax Paradigm检测平台读取Oris细胞迁移（微孔板底贴附有检测屏蔽——detection mask）的荧光强度来检测黑色素瘤细胞迁移的程度。试验做三个复孔。
结果
为了研究和评估新分离的活性化合物的迁移效应，我们使用人黑色素瘤细胞，使用不同的潜在迁移刺激或者抑制因子进行处理（趋化因子CXCL9，Latrunculin和活性化合物）。我们通过检测16小时后的荧光强度（终点法检测）来评估细胞迁移进入检测区域的程度。图3总结了化合物的黑色素瘤细胞迁移效应筛选结果。CXCL9显示出剂量依赖性的检测区域荧光强度增加（发生迁移的细胞），而Latrunculin没有迁移效应。尽管许多活性化合物没有显示出或者仅显示出很低的迁移效应，化合物12和15却明显促进黑色素瘤细胞迁移进入检测区域。倍增诱导水平计算方法：每个孔的荧光强度值（RFU）除以阴性对照的平均RFU值。每个样品的平均值和SD值也被计算出来。
结论
这个试验系统证实了一个有用的工具，可以用于高通量的检测细胞迁移，高通量的药物筛选。这个研究将Oris细胞迁移分析和SpectraMax Paradigm检测平台联合，通过检测荧光强度来对细胞迁移的程度进行定量。这个系统能够区分多种多样的细胞迁移刺激因子和抑制因子。
作者：
Christoph Wiesner，Maren Pfluger，Constantin Bujnow，Katrin Eisenberger，Wolfgang Schutt，Andreas Eger and Harald Hundsberger
联系：
University of Applied Science Krems Krems，Austria
harald.hundsberger@fh-krems.ac.at
