HPLC 故障及排除方法介绍

2024-11-23 上海普迪生物技术有限公司703

诊状	可能的原因	解决方法
（一）保留时间变化	1. 柱温变化	柱恒温
	2. 等度与梯度间未能充分平衡	至少用 10 倍柱体积的流动相平衡柱
	3. 缓冲液容量不够	用 >25mmol/L 的缓冲液
	4. 柱污染	每天冲洗柱
	5. 柱内条件变化	稳定进样条件 , 调节流动相
	6. 柱快达到寿命	采用保护柱
（二）保留时间缩短	1. 流速增加	检查泵 , 重新设定流速
	2. 样品超载	降低样品量
	3. 键合相流失	流动相 PH 值保持在 3~7.5 检查柱的方向
	4. 流动相组成变化	防止流动相蒸发或沉淀
	5. 温度增加	柱恒温
（三）保留时间延长	1. 流速下降	管路泄漏 , 更换泵密封圈 , 排除泵内气泡
	2. 硅胶柱上活性点变化	用流动相改性剂 , 如加三乙胺 , 或采用碱至钝化柱
	3. 键合相流失	同前（二）3
	4. 流动相组成变化	同前（二）4
	5. 温度降低	同前（二）5
（四）出现肩峰或分叉	1. 样品体积过大	用流动相配样 , 总的样品体积小于第一峰的 15%
	2. 样品溶剂过强	采用较弱的样品溶剂
	3. 柱塌陷或形成短路通道	更换色谱柱 , 采用较弱腐蚀性条件
	4. 柱内烧结不锈钢失效	更换烧结不锈钢 , 加在线过滤器 , 过滤样品
	5. 进样器损坏	更换进样器转子
（五）鬼峰	1. 进样阀残余峰	每次用后用强溶剂清洗阀 , 改进阀和样品的清洗
	2. 样品中未知物	处理样品
	3. 柱未平衡	重新平衡柱 , 用流动相作样品溶剂（尤其是离子对色谱）
	4. 三氟乙酸（TFA）氧化（肽谱）	每天新配 , 用抗氧化剂
	5. 水污染（反相）	通过变化平衡时间检查水质量,用 HPLC 级的水
（六）基线噪声	1. 气泡（尖锐峰）	流动相脱气 , 加柱后背压
	2. 污染（随机噪声）	清洗柱 , 净化样品 , 用 HPLC 级试剂
	3. 检测器灯连续噪声	更换氘灯
	4. 电干扰（偶然噪声）	采用稳压电源 , 检查干扰的来源（如水浴等）
	5. 检测器中有气泡	流动相脱气 , 加柱后背压
（七）峰拖尾	1. 柱超载	降低样品量 , 增加柱直径采用较高容量的固定相
	2. 峰干扰	清洁样品 , 调整流动相
	3. 硅羟基作用	加三乙胺 , 用碱致钝化柱增加缓冲液或盐的浓度降低流动相 PH 值 , 钝化样品
	4. 同前（四）4	同前（四）4
	5. 同前（四）3	5. 同前（四）3
	6. 死体积或柱外体积过大	连接点降至最低 , 对所有连接点作合适调整 , 尽可能采用细内径的连接管
	7. 柱效下降	用较低腐蚀条件 , 更换柱 , 采用保护柱
（八）峰展宽	1. 进样体积过大	同（四）1
	2. 在进样阀中造成峰扩展	进样前后排出气泡以降低扩散
	3. 数据系统采样速率太慢	设定速率应是每峰大于 10 点
	4. 检测器时间常数过大	设定时间常数为感兴趣第一峰半宽的 10%
	5. 流动相粘度过高	增加柱温 , 采用低粘度流动相
	6. 检测池体积过大	用小体积池 , 卸下热交换器
	7. 保留时间过长	等度洗脱时增加溶剂含量也可用梯度洗脱
	8. 柱外体积过大	将连接管径和连接管长度降至最小
	9. 样品过载	进小浓度小体积样品

标签： HPLC ,故障,排除

点赞 0反对 0举报 0 收藏 0 打赏 0

更多>同类资讯

推荐图文

实验室安全问题带来的	为什么新型实验室都趋
不进实验室也能做实验	实验室里搭建“模拟市

推荐资讯

点击排行

• 安捷伦在HPLC 2023上推出全套GPC/SEC解决方案	• 沃特世推出新型HPLC系统,助力QC实验室减少40%的
• HPLC_cosmosil 核酸类物质分析	• 生态环境部首发三项水质检测标准涉及HPLC等方
• Porvair推出用于uHPLC和MS应用的无可萃取物深孔	• 赛默飞宣布推出新型单四极质谱和HPLC专用色谱柱
• 安捷伦科技推出多款新产品，分析和纯化解决方案	• HPLC最实用的30个常见问题及对策
• 赛默飞发布新款超高效液相色谱系列产品	• 戴安UHPLC+ 将超高速液相带入“寻常百姓家”