一、ELISA实验中血清的采集、处理和保存;
1、 真空采血针采集2ml新鲜血液,加入无菌试管中;
2、 采血后室温静置1小时;
3、 将采集血液用离心机4℃,2500rpm离心10min,,将离心好的匀浆留上清,弃下面沉淀。
4、 取上清。 分装冻存备用,
2-8℃下,可放置保存24-48小时;
-20℃下,可放置保存1个月;
-70℃下,可放置保存6个月;
5、 根据你的实验需要,取适量上清夜进行各种ELISA测定。
大部分ELISA检测均以血清为标本。血清标本可按常规方法采集,应注意避免溶血,红细胞溶解时会释放出具有过氧化物酶活性的物质,以HRP为标记的 ELISA测定中,溶血标本可能会增加非特异性显色。此外还应避免细菌污染,因为菌体中可能含有含有内源性HRP,也会产生假阳性反应。血清标本宜在新鲜 时检测。如在冰箱中保存过久,其中的可发生聚合,在间接法ELISA中可使本底加深。
二、ELISA实验中血浆的采集、处理和保存;
1、 真空采血针采集2ml新鲜血液,加入无菌试管中;
2、 按1:9加入抗凝剂(EDTA、草酸钠、肝素、枸橼酸钠),30分钟内于冰上分离血浆以减少血小板的污染;(也可以直接用抗凝管采集);
3、 将采集血液用离心机4℃,2500rpm离心5min,,将离心好的匀浆留上清,弃下面沉淀。
4、 取上清。 分装冻存备用,
2-8℃下,可放置保存24-48小时;
-20℃下,可放置保存1个月;
-70℃下,可放置保存6个月;
5、 根据你的实验需要,取适量上清夜进行各种ELISA测定。
注意事项:制备血浆标本需借助于抗凝剂EDTA,抗凝不完全的标本因纤维蛋白原干扰而造成假阳性。
三、ELISA 实验中尿液的采集、处理和保存;
1、 采集尿液样本500ul,加入无菌试管中;
2、 将采集血液用离心机4℃,2500rpm离心10min,,将离心好的样本留上清,弃下面沉淀。
3、 取上清。 分装冻存备用,
2-8℃下,可放置保存24-48小时;
-20℃下,可放置保存1个月;
-70℃下,可放置保存6个月;
4、 根据你的实验需要,取适量上清夜进行各种ELISA测定。
四、ELISA 实验中脑脊液的采集、处理和保存;
1、采集脑脊液样本,加入无菌试管中;
2、将采集血液用离心机4℃,2500rpm离心10min,,将离心好的样本留上清,弃下面沉淀。
3、取上清。 分装冻存备用,
2-8℃下,可放置保存24-48小时;
-20℃下,可放置保存1个月;
-70℃下,可放置保存6个月;
4、根据你的实验需要,取适量上清夜进行各种ELISA测定。
五、ELISA 实验中细胞上清液的采集、处理和保存;
1、采集细胞培养上清液500ul,加入无菌试管中;
2、将采集血液用离心机4℃,2500rpm离心10min,,将离心好的匀浆留上清