①超净工作台:
超净工作台的种类很多,有单面单人、单面双人、双面双人或双面四人等,其工作原理是利用鼓风机,使通过高效滤气的空气,徐徐通过台面,这样使工作环境中具无菌而均匀的空气。
根据层流方式的不同,超净工作台主要分为水平层流式和垂直层流式两种,基本原理大致相同,都是将室内空气经粗过滤器初滤,由离心风机压入静压箱,再经高效空气过滤器,由此送出的洁净气流从一定的均匀的断面风速通过无菌,从而形成无尘无菌的高洁净度工作环境。但两种净化台的气流方向不同。
使用超净工作台应注意的几点问题:
A.净化工作台最好安装在无尘的房间内,最好为隔离好的无菌间内,以免尘土过多易使滤器阻塞,降低净化效果,缩短使用寿命。
B.新安装的或长期未使用的工用台,工作前必须对工作台和周围环境用真空吸尘器或不产生纤维的工具进行清洁工作,再采用药物灭菌法或紫外线灭菌法进行灭菌处理。
C.每次使用工作台时,应先用75%酒精擦洗台面,并提前以30~50min紫外线灭菌灯处理净化工作区内积累的微生物。在关闭紫外灯后应启动送风机使之运转两分钟后再进行培养操作。
D.净化工作区内不应存放不必要的物品,以保持洁净气流型不受干扰。
E.一般情况下,高效过滤器三年更换一次。更换高效滤器应请专业人员操作,以保持密封良好。要定期将粗过滤器中的过布(无纺布)拆下清洗,时间应根据环境洁净程度而定,通常间隔3~6个月进行一次。
F.每次使用净化台要及时清除工作台面上的物品,并用洒精擦洗台面使之始终保持洁净。
②4℃冰箱和低温冰箱;
③CO2培养箱:
A.一定浓度的CO2对细胞生长,尤其是原代培养和单细胞培养有促进作用(5%)。
B.一定浓度的CO2可维持培养液恒定的pH。适用于开放培养,培养箱封口后,可在一般恒温培养箱内培养,但是采用培养皿或多孔板培养时,则需要高湿度和高CO2含量的空气。
C.它增加了湿度,箱体内装有水浴,可以保证培养箱内的湿度。
D.培养箱内装有紫外灯。
E.通过气体流量计可以调节CO2和空气的比例。
F.在水中可加入防腐剂(二氧乙酸)。可防止因CO2培养箱中湿度较高,易长霉菌。
④臭氧发生器;
④离心机;
⑤CO2钢瓶;
⑥液氮罐;
⑦储品柜:用来存放杂物;
⑧紫外灯;
⑨空气净化系统;
⑩倒置显微镜;
3.无菌操作
(1)无菌室的灭菌:
①紫外灯无人时就要打开;
②进无菌室要穿无菌服、戴帽子和口罩;
③每周清洗消毒一次;
④所用物品要以外科手术方式严格消毒;
⑤室内台面要要保持洁净,做完实验后,用75%酒精或千分之三新洁尔灭棉球擦拭超净工作台的台内、边台的台面、倒置显微镜的载物台等;
⑥所用物品要一次性准备好;
⑦瓶口要用酒精火焰消毒;
⑧尽量减少出入。
(2)实验人员的无菌准备:
①肥皂洗手
②穿好隔离衣
③酒精棉球擦手
细胞培养室必备的设备有:
1. 超净台;
2. 二氧化碳培养箱;
3. 倒置显微镜;
4. 二氧化碳压缩气体;
5. 液氮罐;
6.低温冰箱(-20度和-70度);
7. 过滤装置;
8. 离心机;
9. 酶标仪等等。
试剂和小的工器具也很多,如:培养基、培养瓶、培养板、移液枪、酸缸、滴管、离心管、血球计数板、DMO、PBS、胰酶等等。
细胞培养室,最好选择独立房间,超净台应放置在比较洁净的房间,如果条件允许,最好按洁净厂房要求设计细胞培养室,即使房间做不到空气过滤,也至少应是专用的,进出时要更换工作衣。