一、准备室
准备室主要用于配备培养基和样品处理等。准备室不仅要洗刷器皿,还需要配有存放器具、试剂柜或材料的实验台、专柜、冰箱、电炉和电源、上下水道等。同时室内还应设有加热器、蒸锅,洗刷器皿用的盆、桶等,还应有各种去污粉、瓶刷、洗衣粉、肥皂等。
二、普通实验室
普通实验室主要是进行微生物的观察、计数和生理生化测定工作的场所。普通实验室内的陈设因工作侧重点不同还有很大的差异。一般均需配备显微镜、实验台、柜子和凳子。实验柜要足以容纳日常使用的用具及药品,同时还需要达到平整、光滑的要求。
三、恒温培养室
1.培养室内设备及用具
①外室应有专用的工作服、鞋、帽、口罩、手持喷雾器和5%石炭酸溶液、70%酒精棉球等。
②内室通常配备培养架和摇瓶机(摇床)。常用的摇瓶机有旋转式、往复式两种。
2培养室的灭菌、消毒
①同无菌室的灭菌、消毒措施。
②小规模的培养可不启用恒温培养室,而在恒温培养箱中进行。
3.培养室的设置
①内外室都应在室中央安装紫外线灯,以供灭菌用。
②为满足微生物对温度的需要,需安装恒温恒湿机。
③分隔内室与外室的墙壁上部应设带空气过滤装置的通风口。
④培养室应有内、外两间,内室是培养室,外室是缓冲室。房间容积不宜大,以利于空气灭菌,内室面积在3.2×4.4=14m2左右,外室面积在3.2×1.8=6m2左右,高以2.5m左右为宜,都应有天花板。
四、灭菌室
灭菌室主要用于培养基的灭菌和各种器具的灭菌,灭菌室内应备有高压蒸汽灭菌器、烘箱等灭菌设备和设施。
五、无菌室
无菌室也可称之为接种室,主要用于系统接种、纯化菌种等无菌操作的专用实验室。在微生物工作中,菌种的接种移植是一项主要操作,这项操作的特点就是要保证菌种纯种,防止杂菌的污染。在一般环境的空气中,由于存在许多尘埃和杂菌,很易造成污染,对接种工作干扰很大。
1无菌室工作规程
①无菌室灭菌。每次使用前开启紫外线灯照射30min以上,或在使用前30min,对内外室用5%石炭酸喷雾。
②用肥皂洗手后,把所需器材搬入外室;在外室换上已灭菌的工作服、工作帽和工作鞋,戴好口罩,然后用2%煤酚皂液将手浸洗2分钟。
③将各种需用物品搬进内室清点、就位,用5%石炭酸在工作台面上方和操作员站位空间喷雾,返回外室,5~10min后再进内室工作。
④接种操作前,用70%酒精棉球擦手;进行无菌操作时,动作要轻 缓,尽量减少空气波动和地面扬尘。
⑤工作中应注意安全。如遇棉塞着火,用手紧握或用湿布包裹熄灭,切勿用嘴吹,以免扩大燃烧;如遇有菌培养物洒落或打碎有菌容器时,应用浸润5%石炭酸的抹布包裹后,并用浸润5%石炭酸的抹布擦拭台面或地面,用酒精棉球擦手后再继续操作。
⑥工作结束,立即将台面收拾干净,将不应在无菌室存放的物品和废弃物全部拿出无菌室后,对无菌室用5%石炭酸喷雾,或开紫外线灯照射30min。
2.无菌室的设置
无菌室应根据既经济又科学的原则来设置。其基本要求有以下几点:
①无菌室容积小而严密,使用一段时间后,室内温度很高,故应设置通气窗。通气窗应设在内室进门处的顶棚上(即离工作台最远的位置),最好为双层结构,外层为百叶窗,内层可用抽板式窗扇。通气窗可在内室使用后、灭菌前开启,以流通空气。有条件可安装恒温恒湿机。
②无菌室应有内、外两间,内间是无菌室,外间是缓冲室。房间容积不宜过大,以便于空气灭菌。最小内间面积2×2.5=5m2,外间面积1×2=2m2,高以2.5m以下为宜,都应有天花板。
③在分隔内间与外间的墙壁或“隔扇”上,应开一个小窗,作接种过程中必要的内外传递物品的通道,以减少人员进出内间的次数,降低污染程度。小窗宽60cm、高40cm、厚30cm,内外都挂对拉的窗扇。
④内间应当设拉门,以减少空气的波动,门应设在离工作台最远的位置上;外间的门最好也用拉门,要设在距内间最远的位置上。
3.无菌室的灭菌消毒
①喷雾:在每次使用无菌室前进行。喷雾可促使空气中微粒及微生物沉降,防止桌面、地面上的微尘飞场,并有杀菌作用。可用5%石炭酸喷雾。
②薰蒸:这是无菌室彻底灭菌的措施。无菌室使用了较长时间,污染比较严重时,应进行薰蒸灭菌。可用甲醛、乳酸或硫磺薰蒸。
③紫外线照射:在每次使用无菌室前进行。紫外线有较好的杀菌效果。通常应开启紫外线灯照射30~60min。
4.无菌室内设备和用具
①在内室和外室各安装一个紫外灯(多为30W)。内室的紫外线灯应安装在经常工作的座位正上方,离地面2m,外室的紫外线灯可安装在外室中央。
②无菌室内的工作台,不论是什么材质、用途的,都要求表面光滑和台面水平。
③内室应有酒精灯、常用接种工具、不锈钢制的刀、剪、镊子、70%的酒精棉球、工业酒精、载玻璃片、特种蜡笔、记录本、铅笔、标签纸、胶水、废物筐等。
④外室应有专用的工作服、鞋、帽、口罩、盛有来苏儿水的瓷盆和毛巾、手持喷雾器和5%石炭酸溶液等。
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