SYBR Green I Master Mix

SYBR Green I Master Mix  

产品简介：本产品为基于HotStart Taq Polymerase 的荧光检测定量PCR即用反应液。 
1、使用简便：除本品外，只需再加入样品/引物/探针使成欲达体系即可开始使用。 

2、广泛的应用性： 可用于MJ/BIO-RAD 仪器 

3、可实施热启动PCR：  本产品内含优质高效的热启动Taq 酶，无需特别操作即可进行热启动PCR。

 
●试剂盒特长
1． 适用于Real Time PCR反应，可以快速正确地对目的基因进行检测、定量。

2． 在1×浓度的Premix中，预先混有SYBR GreenI，PCR反应液配制时，只需加入模板、引物、灭菌蒸馏水便可进行Real Time PCR反应，操作简单方便。
 
●操作注意
1． 冻结制品融解后请上下颠倒轻轻均匀混合，避免振荡器等剧烈搅拌。混匀制品后请用离心机轻微离心后使用。

2． 本制品使用前请于-20℃保存，融解后的制品请于冰上放置，使用后请立即保存于-20℃。注意：使用及保存均需避光。

3． 尽量避免多次反复冻融，如果需要多次使用时，请在第一次融解后将制品按适当量分装后保存。

4． 本制品中含有荧光染料SYBR Green I，保存制品时或配制PCR反应液时请避免强光照射。

5． 反应液的配制、分装请一定使用新的（无污染的）枪头、Microtube等，尽量避免污染。
 
●Real Time PCR操作顺序
1． 溶解试剂，上下颠倒混匀，确认溶液完全溶解。
注）避免用振荡器混匀，剧烈振荡会降低制品性能。
以下操作请在冰上进行，长时间室温放置会降低制品性能。 

2． 配制PCR反应用混合液，分装至PCR反应管中。

3． 添加PCR扩增用模板。

4． 使用Real Time PCR扩增仪，进行PCR扩增反应。

注）1. 反应液配制方法和PCR扩增条件请参照使用方法。
    2. Real Time PCR仪的使用方法，请参照各种仪器说明书。
   
    
●使用方法
A）应用ABI PRISM 7000，7700，7900 Real Time PCR扩增仪的使用方法
※ 请按照ABI PRISM?（Applied Biosystems公司）的使用说明书要求进行实验操作。

1． 按下列组份配制PCR反应液（反应液配制请在冰上进行）。
PCR mix                 46.0μL
上游引物                  1.0μL
下游引物                  1.0μL
模板                         2.0μL
 
注意：1）、通常引物终浓度为0.2μM可以得到较好结果。反应性能较差时，可以在0.1～1.0μM范围内调整引物浓度。
2）、DNA模板的添加量通常在100 ng以下。因不同种类的DNA模板的溶液中含有的靶基因的拷贝数不同，必要时可进行梯度稀释，确定最佳的DNA模板添加量。

2. 进行Real Time PCR反应。
建议采用两步法PCR反应程序，如果该程序得不到良好的实验结果时，再进行PCR条件的优化。由于使用Tm值较低的引物等原因，两步法PCR反应扩增性能较差时，可以尝试进行三步法PCR扩增反应。
 
B）应用Light Cycler Real Time PCR扩增仪的使用方法
※ 请按照LightCycler?（Roche Diagnostics公司）的使用说明书要求进行实验操作。
 
1．按下列组份配制PCR反应液（反应液配制请在冰上进行）。
  
PCR mix                  16.0μL
上游引物                  1.0μL
下游引物                  1.0μL
模板                         2.0μL
 
注意：*1、通常引物终浓度为0.2μM可以得到较好结果。反应性能较差时，可以在0.1～1.0μM范围内调整引物浓度。
*2、DNA模板的添加量通常在100 ng以下。因不同种类的DNA模板的溶液中含有的靶基因的拷贝数不同，必要时可进行梯度稀释，确定最佳的DNA模板添加量。
 
2. 进行Real Time PCR反应。

PCR反应用毛细管请用离心机轻轻离心后放入Light Cycler中进行Real Time PCR反应。建议采用两步法PCR反应程序，如果该程序得不到良好的实验结果时，再进行PCR条件的优化。由于使用Tm值较低的引物等原因，两步法PCR反应扩增性能较差时，可以尝试进行三步法PCR扩增反应。
 
 
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